É formado por uma galeria de pinturas e de esculturas inaugurada por Francisco I de Medici em 1581. Símbolo da cultura florentina desde o século XVI até hoje, o edifício foi construído pela administração do grão-ducado da Toscana. Desenhado por Giorgio Vasari, foi encomendado por Cosimo I, pai de Francisco I.

Foi concebido para ser o edifício da administração do grão-ducado, e nele existia, desde o início, uma pequena galeria com obras de arte pertecentes à família Medici. Esta coleção ao longo do tempo foi crescendo, assim como o espaço necessário para conté-la. Por esse motivo é considerado um dos primeiros museus da Europa. Hoje é o museu mais visitado da Itália. Possui uma brilhante coleção de pinturas do Renascimento florentino, e o conjunto de obras de Botticelli é talvez o mais conhecido, entre eles o famoso Nascimento de Vênus e a Primavera.

Muitas outras obras importantes podem ser apreciadas neste museu. O Tondo Doni é a verdadeira obra-prima de Michelangelo “pintor” e a Vênus de Ticiano é a pintura melhor executada por este artista veneziano.

A entrada para o Corredor Vasariano encontra-se ao interno da galeria Uffizi. Cosimo I encomendou a Vasari, por ocasião do casamento de seu filho Francisco I com Joana da Áustria, a construção de um longo corredor com cerca de 800 metros, que ligasse as duas partes da cidade, uma em cada margem do rio Arno. Mais especificamente o corredor ligava o Palazzo Pitti ao Uffizi (e mais tarde até ao Palazzo Vecchio) passando sobre o rio.

(Este corredor é hoje também um museu, mas geralmente está fechado, e não faz parte do percurso turístico habitual. Pode ser visitado só através de reserva feita com certa antecedência.)